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细胞培养中常见的污染及解决方法

黑点污染

黑色的游动点能穿透滤膜并在空气中扩散。电镜形态学观察法是一种比较经典、可靠的方法，被认为是确定细胞凋亡的金标准。它们在低倍镜下显示为黑色圆点，在高倍镜下显示为可移动的黑点。培养液也不浑浊，一般影响较小，因此细胞仍可使用。通常，黑点污染后，细胞生长良好，运动物体无明显增加，培养基的颜色和透明度无明显变化。在同一批培养的细胞中也可以发现类似的现象。

解决方法：黑点对细胞生长状态没有明显影响，细胞增殖后会自然消失，因此除了置换外，无需特殊处理。如果细胞可能被小的运动点污染，建议增加培养皿细胞密度，以提高细胞存活率。

细胞培养中常见的污染及解决方法

真菌污染

真菌污染后，培养基一般清澈，保持原色。(2)碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，无菌条件下用灭菌消毒后的镊子和剪刀分离出大鼠股骨和胫骨，剔除骨头表面肌肉,PBS溶液冲洗两遍。细丝可以在显微镜下观察到。，一些真菌类似于死细胞碎片，但其中许多清晰可见，看起来像珊瑚，比较容易区分。此外，它们会慢慢长出细细的黑色细丝，因为它们生长得比较慢，不像细菌那样容易被发现，一旦发现培养基被污染，它们将很难存活。

解决方法：一旦被真菌污染，果断丢弃，然后对细胞房、CO2 培养箱、器皿和培养基进行消毒。

Q:如何避免中沉淀物的出现？

A:首先要注意正确的解冻步骤，而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加，使用中应该尽量避免：

（1）热灭活；

（2）在 37℃ 下培养；

（3）反复冻融；

（4）γ 射线照射；

（5）长期储存在 2-8℃；

（6）在室温下放置时间过长

Q:如何去除中的沉淀？

A:如想去除这些絮状沉淀物，可以将分装到无菌离心管中，以 400g 离心，上清液即可直接加入到培养基 内一起过滤。

注意：不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为这可能阻塞滤膜。